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用流式细胞光度术研究智能功对肝癌细胞DNA合成及细胞周期的影响

2015-6-5 12:43| 发布者: admin| 查看: 1476| 评论: 0

摘要: 中  国医学科学院基础医学研究所  李梅  张世馥  吴洪       北京智能气功分会东单公园辅导站  刘家洪  李逢春   摘  要   用流式细胞仪对人肝癌细胞(BEL—7402)进行DN1 1合成及细胞周期分析;结果证明 ...

中  国医学科学院基础医学研究所  李梅  张世馥  吴洪

      北京智能气功分会东单公园辅导站  刘家洪  李逢春    

   摘  要   用流式细胞仪对人肝癌细胞(BEL—7402)进行DN1  1合成及细胞周期分析;结果证明实验组细胞 生长受抑制·细胞阻滞堆积于DNA合成前期(G上期),使细胞不能进人DNA合成期(S期),从而干扰DNA复制。 
  关键词  智能气功  流式细胞光度术(FCM)  DNA合成  细胞周期 

                      前言   

  我们曾实验证明智能功能抑制动物移值性肿瘤的生长及体外培 养癌细胞的增殖。但其机理如何,尚需探索门本文用流式细胞光度术研究分析智能功对肝癌DNA合成及细胞周期的影响以初步探索其抑瘤机理。

                   材料与方法 

    一、细胞培养 
    实验所用癌细胞,乃上海细胞生物所陈瑞铭等建立的人体肝癌 细胞系(BEL-7402)、为上皮样恶性细胞。我们将细胞培养J几含 15%小牛血清的RPMI 1640培养基内。设实验组与对照组,分置于两个孵箱内培养。实验组由气功师发气,每次3一5分钟对照组不作 处理。实验重复3次。 
    二、DNA荧光染色和F CM检测 
    按此项检测的特殊技术要求制作癌细胞标本。经RNA酶消化碘化丙(ProPidium Iodide.PI)荧光染色,应用FACS·120荧光激活细胞分选仪(Becton—Dicknson公司产品),以每秒测量1000个细胞的速度,测出单个细胞的}l荧光强度,每个样品至少测量10000 个细胞。激光光源有“瓦氢离子激光器,波长为488mm,PI荧光通过 585nm阻断滤片,由光电倍增管检测,多道脉冲分析器分析,显示细 胞DNA的散点图和组方图,所得数据输入计算机,按FAC 420软件多正态拟合程序进行曲线拟合分析,计算出DN八含量·得出细胞 周期(G1、S5、G2+M )的百分比和G1的cv%(变异系数)。 

                      结果  

     (一)FCM枪测所得数据说明:对照组的癌细胞处于增殖迅速的状态,DNA合成期(S期)的细胞数较高。三次实验分别为61%,64%及39%。实验组周期是35%、40%与27%。DNA合成前期(G1i期)的细胞数,实验组却高于对照的Gl期2一3倍,实验为35%、40%、48%。对照组只有10%,19%与18%,提示实验组癌细胞经外气作用之后,细胞生长受到了抑制。因而多数的细胞被阻滞。堆积于G1期, 使细胞不能顺利地向S期进行,从而干扰了DNA的复制。 
    (二)我们还同时研究了外气对BFL—7402细胞生长曲线的影 响,结果表明实验组细胞的增殖受到明显抑制,重复两次试验,结果 类似。与FCM检测结果一致。 

                      讨论 

    我们知道细胞周期分为四个期:①从有丝分裂完成到DNA复 制之前的这段间隙时间,称为G1期;②DNA复制的同时,即S期, DNA在S期含量增加一倍;③从DNA复制完成到有丝分裂开始· 这段时间称 G2期;①从细胞分裂开始到结束为M期。以往分析细 胞周期,多用生物化学方法测定细胞群体中I的平均含量·用3H一胸腺陡核昔掺人的自显影方法测定细胞周期的参数,或用静 态细胞光度计,测定大量细胞T}含量后,作出DNA含量分布的 组方图,进行细胞周期分析,这些方法不但费时费力,而且常达不到 统计学的精确度。 
  FCM是现代国际较新技术,它能快速、准确地测出每个细胞的DNA含量,计算出细胞增殖周期的移行变化。从我们的实验结果证明外气引起BEL—7402肝癌细胞在Gl期积聚,从而阻滞细胞不能 顺利进人S期,即DNA合成期,此期进行DNA遗传物质的复制,由 于外气的于扰,DNA合成受到影响与阻断,此乃外气抑瘤机制之一。 
    虽然实验是初步的,但为智能功抑瘤机制提供了一定的理论依据。 
  注:  李梅  研究员  张世馥  副研究员   刘家洪  教授

                            2012-09-16


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